Per impostazione predefinita, tutto il software supporta più estensioni di file. 3D Slicer supporta almeno 1 diverse estensioni di file. I file di base supportati da 3D Slicer sono .MRML. Tuttavia, non tutte le estensioni elencate nell'elenco vengono sempre utilizzate per salvare gli effetti del lavoro in 3D Slicer. Molto spesso, i file con tali estensioni vengono utilizzati come file di dati di origine utilizzati da 3D Slicer.
3D Slicer può essere utilizzato per convertire i formati di file tra le estensioni di file elencate di seguito. È possibile aprire un file con una delle estensioni di file di seguito tramite 3D Slicer e provare a salvarlo in un altro formato di file, supportato anche da 3D Slicer.